新观点重组抗体表达FAQ

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一．哺乳动物细胞重组抗体的表达过程

传统的生产抗体的方式是用抗原刺激动物免疫系统，这种方式需先制备抗原，且利用这种方法生产抗体难以满足大量的生产(需求大量的验耗材和时间)。而哺乳动物细胞生产抗体的方式有一定的势。①已知抗体的基因序列，将序列克隆到表达载体上，导入到哺乳动物细胞体内培养，通过一系列的筛选简单比较终获得能够稳定生产此抗体基因的稳定细胞系，这一过程需要大量的时间，才能筛选出足够稳定表达的细胞系，并能够在后续验中稳定长期生产。②未知序列的抗体大量生产，先刺激动物免疫系统得到少量抗体通过测序得到抗体序列，通过哺乳动物细胞重组抗体表达筛选稳定表达的细胞系，满足大量生产需求。

二．用哺乳体系表达重组抗体时，选择HEK293细胞和CHO细胞的区别

CHO细胞的势是：
（1）能在化学成分限定和血清悬浮培养基中稳定生长；
（2）该细胞基因组信息明确，在人类致病病应答方面表现出合理的安全性；
（3）能够表达与人相似的翻译后修饰；
（4）容易得到基因改造的细胞。
HEK293细胞的势是：
（1）具有更的生长速度；
（2）具有更高的生长密度、转染效率高；
（3）表达后修饰更接近人体蛋白的结构。

．如何提高细胞的生长能力、抗凋亡能力

为提高细胞的生长能力，可过度表达抗凋亡基因。如：NS0和CHO细胞过度表达Bcl-2，可以抑制细胞线粒体凋亡途径；CHO细胞中过度表达P21、P27，可使细胞生长周期停滞在G1期；通过过度表达E1B-19K、Aven基因，或热激蛋白，牛磺酸转运蛋白等，也能显著提高细胞活性、延长培养周期。
为降低细胞培养过程中的副产物，对副产物代谢过程中的关键基因进行操作。如：通过上调细胞的丙酮酸羧化酶基因，下调乳酸脱氢酶基因，来减少乳酸的产生；通过过度表达尿素循环酶、氨甲酰磷酸合成酶、鸟氨酸氨甲酸基转移酶等，来减少氨的生成。

四．如何提高重组抗体的翻译、修饰及分泌能力

对多于多数重组细胞而言，翻译、修饰及分泌是抗体的生物合成过程的限速步骤。因此，可以对参与目的蛋白生物合成的分子伴侣进行遗传操作，以也可提高宿主细胞的重组抗体表达能力。此类分子伴侣包括：蛋白质二硫键异构酶（proteindisulfideisomerase）、内质氧化还原酶（Endoplasmicreticulumoxidoreductase）、重链结合蛋白（theheavychain-bindingprotein）、ERp57，GRP94、X-盒结合蛋白1(XBP-1S)等。
抗体的糖基化修饰对其生物活性影响显著，利用细胞工程技术对宿主的糖基化修饰能力进行改造，可以提高重组抗体的临床疗效。如：通过敲除岩藻糖转移酶（FUT8），或过度表达乙酰氨基葡萄糖转移酶（GnT-III），可降低重组抗体糖链中的岩藻糖含量，以提高抗体药物的ADCC效应功能；通过过度表达唾液酸转移酶，提高抗体的唾液酸含量，以提高抗体的抗炎活性等。

五．重组抗体的势是什么

（1）周期短：重组抗体在数周即可生产，而杂交瘤抗体制备需要数月；
（2）一致性高、重复性好：重组抗体的基因是确定的，抗体生产是可控且可靠的，使得抗体的批次间差异小，重复性好；
（3）灵敏度和特异性高：基因工程改造，利用重组技术选择的抗体更质；
（4）免疫原性低：需免疫和筛选；
（5）大规模抗体制备：可现动物体外生产。

六．如何提高抗体的稳定性

化洗脱条件：可以从高的pH逐渐降低；纯化的样品要及时中和；纯化验过程中样品低温制备和保存；添加蛋白保护剂，比如甘油、吐温；抗体浓度较高时需要及时稀释，避免发生高浓度聚集。

重组抗体生产使制备人源化抗体和人源抗体成为可能，是单抗药物产业化的关键技术，重组抗体广泛应用于免疫诊断，治疗性抗体等领域。泰克生物具有完善的重组抗体表达生产平台，丰富的重组蛋白和重组抗体表达经验，基于噬菌体展示技术，我们能够为客户提供质的重组抗体制备和筛选服务。同时，结合大规模重组蛋白发酵平台，我们能够为客户生产包括单链抗体（scFv），单域抗体，人源化抗体和Fc嵌合抗体等单克隆抗体。泰克生物的瞬时表达系统以CHO细胞和HEK293细胞为表达宿主进行悬浮培养，可生产毫克至千克级的重组抗体。另外，我们可以根据您的需要进行定制抗体制备，包括标签去除、内素控制、SEC-HPLC分析、糖基化分析等。



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