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聊聊纳米抗体重组表达系统介绍

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发表于 昨天 15:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
一.纳米抗体重组表达系统

1原核表达系统:利用大肠杆菌表达纳米抗体具有几个势:大肠杆菌遗传背景清晰、基因操作简单、易培养。另外,大肠杆菌表达系统具有成熟的操作方法以及大量常用的表达载体和宿主。在大肠杆菌中表达纳米抗体有两种表达策略:信号肽介导的周质表达和细胞质表达。纳米抗体在周质中的表达量通常较低,为提高纳米抗体在周质的表达水平,可将纳米抗体与标签蛋白进行融合表达。大肠杆菌中表达纳米抗体常用的表达宿主如下表所示:

菌株
特点
BL21(DE3)
高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)
Rosetta
可增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达
SHuffle
提供胞质内氧化环境,有利于目的蛋白二硫键的正确折叠
ArcticExpress
低温诱导菌株
HB2
琥珀终止密码子非抑制性菌株,现蛋白展示和单体表达的转换

2真核表达系统

21酵母细胞:真核细胞具有高级折叠、翻译后修饰等功能,这些特点能提高抗体(包括全长IgG)的分泌量。酵母是一种低等的单细胞真核生物,相对于其他真核细胞来说,其生长周期短,易培养,基因操作简单。酿酒酵母遗传背景清楚,长期应用在食品和医药工业,安全可靠,不产生素,因此成为生产抗体的重要表达系统之一。纳米抗体J区某些氨基酸能参与内质中分子伴侣的募集,从而缩小酿酒酵母与哺乳动物细胞分子伴侣机制的差异,有利于纳米抗体折叠动力学,进而影响纳米抗体在酿酒酵母中的产量。
22丝状真菌:木霉和曲霉属的部分丝状真菌具有高效的蛋白分泌能力,能将大量的蛋白质和代谢物分泌到培养基中。为提高抗体的表达量,抗体基因片段可被插入到表达载体中与葡糖淀粉酶启动子及葡糖淀粉酶的N端进行融合表达,同时引入KexB等酶切位点,以便获得目的蛋白。
23昆虫细胞:纳米抗体在昆虫表达系统中现高产量表达,而IgG、scFv及Fab在昆虫表达系统中产量较低,强启动子控制下结构复杂蛋白可能来不及形成正确折叠及翻译后修饰,导致目的蛋白发生聚集,降低抗体产量。
24哺乳动物细胞:生产重组抗体及抗体片段目前比较主要的细胞是CHO、NS0、Sp20和HEK293。大多数文献中采用CHO生产抗体抗体片段,迄今为止,50%工业上生产的治疗性蛋白仍然由CHO生产。

二.提高纳米抗体产量的策略

21分子水平:利用基因合成技术对基因编码序列进行密码子化,使其翻译效率比较大化,可有效增加蛋白质的表达量;表达速率控制是与重组抗体产量相关的一个重要因素,基于lac启动子及其衍生启动子能够现抗体及抗体片段的更高产量;大肠杆菌中可通过提高蛋白折叠效率增加重组蛋白可溶性,分子伴侣(GroELGroES等)或折叠酶(Dsb家族蛋白)过表达细胞(SHuffle),均可提高重组抗体的产量。
22表达水平:原核表达系统适合表达不需要糖基化的小分子抗体,如scFv,VHH等;真核表达系统能够对重组蛋白进行糖基化等翻译后修饰,适合表达治疗性抗体;在纳米抗体培养过程中使用营养成分丰富的培养基及维持pH稳定有助于细胞生长,使细胞维持高密度,有利于抗体产量的提高。
提高纳米抗体的生产水平将能够显著降低成本。可以从个方面提高纳米抗体的产量:基因水平方面,对目的基因序列的修饰及载体表达元件的化等;表达水平方面,对表达系统、宿主、载体的选择及培养条件的化等。

泰克生物着力于为客户提供高质量,且具性价比的抗体药物前期发现技术服务。我们在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得,积累了充足的抗体定制和重组抗体生产经验。基于完善的重组抗体表达平台,泰克生物能够为客户提供包括但不限于驼源、羊源、鼠源等不同物种的单克隆抗体(包括但不限于VHH抗体、scFv抗体、Fab抗体、嵌合抗体、人源化抗体及各种类型的Fc融合重组抗体)重组表达制备服务,及其配套的完整可追溯性文件体系。泰克生物的CHO-K1、Expi293F等哺乳动物细胞宿主体系配合自主的分泌型高表达载体及各种规格的放大表达体系,能够为客户提供高质量的重组抗体表达服务,满足各类客户的科研和生产需求。


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